1.實驗材料SD大鼠，細胞培養板，培養皿，小牛血清等2.實驗步驟之固定1 . 組織取材 SD 大鼠乙醚吸入麻醉后腹腔內注射氯胺酮(22 mg/kg)。 以左側第 4 肋水平作橫切口, 取胸大肌約 1 cm3 , 并將其修剪成 1 mm3 大小的肌小粒 。反復用Hanks 液洗去血細胞 , 將肌小粒小心貼附于事先用明膠包被的細胞培養瓶底部 , 加入適量成肌細胞增殖培養液(Ham' s F-10 培養基中加入15 %小牛血清、青霉素100 U/ml 、鏈霉素 100 U/ml)。將瓶底向上輕置于37℃、5 %CO2 、飽和濕度的培養箱中, 4 h 后輕輕翻轉培養瓶 , 使肌小粒浸浴于培養液中。 3 d 換液一次 , 待細胞長滿瓶底即可傳代。 2 .成肌細胞的培養 采用組織塊培養法貼塊 2 d 后即可見有細胞從肌小粒邊緣爬出 , 細胞呈梭形, 胞漿透明。1 周后細胞可長滿瓶底的 60 %～ 70 %, 其數目可達 105 , 此時細胞可呈多角形 , 充分伸展, 部分細胞密集區可見細胞呈向心性生長 , 相互間排列整齊 , 類似骨骼肌的縱切面。 3 .成肌細胞的分化鑒定 將傳代后的細胞接種至 6 孔板, 加入增殖培養液 , 待細胞長至80 %滿時, 換入成肌細胞誘導分化液(低糖DMEM培養基中加入 2 %馬血清、0 .5%雞胚提取物、青霉...
發布時間:
2018
-
11
-
29
瀏覽次數：346