時間:
2017
-
03
-
29
DIGE —雙向熒光差異凝膠電泳(Two-dimensional fluorescence difference gel electrophoresis,2D-DIGE),是在傳統雙向電泳的基礎上發展而來的新型蛋白質組學定量技術,其分離蛋白質混合的原理與雙向電泳是一致的,主要利用蛋白質的等電點和分子量的差異來分離蛋白質混合物,同時應用熒光染料的靈敏度及內標的使用等技術,使其在定量蛋白質組學的研究中效果明顯優于傳統雙向電泳。 DIGE使用的熒光染料有Cy2, Cy3和Cy5,它們能與蛋白質的賴氨酸側鏈氨基反應而使蛋白質被標記,被標記蛋白質的等電點和分子量不受影響,等量混合標記好的蛋白質后進行雙向電泳,不同凝膠之間可以通過cy2內標匹配,消除凝膠之間的差異,蛋白質表達量的變化則通過cy3和cy5不同熒光的強度來體現。 二、與常規雙向電泳后,銀染或考染膠相比,DIGE具有以下優勢: 1、靈敏度高,低可檢測到125pg的蛋白質; 2、高效性,同一塊凝膠上可以電泳兩個樣品,減輕了工作量; 3、線性范圍更廣,動態范圍高達10-5; 4、...